Sắc ký lớp mỏng là một phương pháp phân tích hóa học dựa trên việc sử dụng một lớp chất hấp thụ có độ dày 0,1-0,5 mm làm pha tĩnh. Phương pháp TLC có thể được sử dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau và cho phép xác định nhiều loại hợp chất hóa học.
Nguyên tắc phương pháp
Phương pháp sắc ký lớp mỏng ra đời từ phương pháp sắc ký giấy và những thí nghiệm đầu tiên được thực hiện vào những năm 80 của thế kỷ 19. Việc sử dụng tích cực phân tích này chỉ bắt đầu sau năm 1938.
Kỹ thuật TLC bao gồm pha động (chất rửa giải), pha tĩnh (chất hấp thụ) và chất phân tích. Pha tĩnh được áp dụng và cố định trên một tấm đặc biệt. Tấm có thể được làm bằng thủy tinh, nhôm hoặc nhựa - đây là những chất nền có thể tái sử dụng phải được rửa kỹ, làm khô và chuẩn bị cho việc thi công chất hấp phụ sau mỗi lần sử dụng. Cũng có thể sử dụng đĩa giấy được xử lý sau khi sử dụng.
Silica gel thường được sử dụng nhất làm pha tĩnh, nhưng có thể sử dụng các chất hấp thụ khác, ví dụ, nhôm oxit. Khi sử dụng chất hấp thụ này hoặc chất hấp thụ đó, công nghệ phải được tuân thủ nghiêm ngặt để kết quả chính xác, ví dụ, vì silica gel có thể cho kết quả không chính xác nếu không khí trong phòng thí nghiệm quá ẩm.
Dung môi được sử dụng làm pha động, ví dụ, nước, axit axetic, etanol, axeton, benzen. Việc lựa chọn dung môi phải được thực hiện một cách có trách nhiệm, vì kết quả của phép sắc ký phụ thuộc trực tiếp vào chất lượng của nó (độ nhớt, tỷ trọng, độ tinh khiết). Một dung môi riêng được chọn cho mỗi mẫu phân tích.
Phân tích
Mẫu phải được pha loãng trong dung môi. Nếu không xảy ra sự hòa tan hoàn toàn và vẫn còn quá nhiều tạp chất thì có thể làm sạch mẫu bằng cách chiết.
Việc áp dụng mẫu vào tấm có thể được thực hiện tự động hoặc thủ công. Ứng dụng tự động sử dụng phương pháp microspray trong đó mỗi mẫu được phun lên khu vực thích hợp của chất nền. Đối với ứng dụng thủ công, một micropipette được sử dụng. Dấu bút chì được đặt trên đĩa cho mỗi mẫu. Mỗi mẫu được áp dụng với một ống mao dẫn lên tấm theo một đường ở một khoảng cách vừa đủ từ các vết để không phản ứng với cacbon từ chì.
Đĩa được đặt trong một bình, ở đáy có đổ dung dịch rửa giải. Giá đỡ được đặt với một cạnh vào bình lên đến vạch đã đánh dấu. Đậy kín bình để tránh pha động bay hơi. Dưới tác dụng của lực mao dẫn, chất rửa giải bắt đầu dâng lên lớp chất hấp thụ. Khi dung dịch rửa giải đạt đến một mức nhất định, đĩa được lấy ra khỏi bình và làm khô.
Nếu chất mong muốn không có màu, thì nó sẽ không thể nhìn thấy trên bề mặt. Do đó, trực quan hóa được thực hiện - xử lý tấm bằng hơi iốt hoặc thuốc nhuộm khác.
Sau khi xử lý như vậy, kết quả được đánh giá. Các vùng màu có cường độ khác nhau xuất hiện trên chất hấp thụ. Để xác định một chất (hoặc một nhóm chất), các vùng màu, kích thước, cường độ và độ linh động của chúng được so sánh với một mẫu chuẩn.
Phương pháp TLC được sử dụng rộng rãi vì nhanh, rẻ, chính xác, trực quan, không cần thiết bị phức tạp và dễ diễn giải.
